冠心病相关SLC22A3基因中新发现负性调控序列的性质与功能鉴定

作     者：何佳静 夏云 丁艳辉 He Jiajing;Xia Yun;Ding Yanhui

作者机构：重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016 重庆医科大学附属第一医院临床研究中心重庆400016 

出 版 物：《重庆医科大学学报》 (Journal of Chongqing Medical University)

年 卷 期：2020年第45卷第4期

页      面：436-441页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:81170189) 

主　　题：冠心病 SLC22A3基因 绝缘子 沉默子 DNaseⅠ超敏位点 

摘      要：目的:拟对课题组前期发现的冠心病相关SLC22A3基因intron7区域中的2段DNA负性调控序列的性质及功能进行研究,以明确其为沉默子还是绝缘子。方法:利用生物信息学分析2段负性调控序列在所培养细胞系中的脱氧核糖核酸酶I(DNaseⅠ)的敏感性,并以包含人SLC22A3基因全长序列的细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)为模板,PCR扩增2段负性调控序列,以pGL3-Control作为工具载体,将2段序列克隆入报告基因Luciferase(LUC)的启动子与增强子之间以及增强子的下游,构建4组重组质粒,并以pGL3-Control质粒作为空白对照,与内参质粒p RL-SV40共转染人胚肾细胞HEK293T,24 h后检测荧光素酶活性。结果:2段负性调控序列均位于DNaseⅠ超敏位点,明确了其为顺式调控元件的性质。4组重组质粒pGL3-con-SLCi7-447X、p GL3-con-SLCi7-447S、p GL3-con-SLCi7-460X及pGL3-con-SLCi7-460S荧光素酶活性分别为2.353±0.323、3.046±0.415、3.016±0.119、3.833±0.282,相较于空白对照pGL3-Control(7.423±0.230),荧光素酶活性均明显降低(P0.05)。结论:SLC22A3基因的intron7区域中存在2个负性调控元件,其负性调控作用不受位置的影响发挥沉默子调控功能,为进一步对冠心病相关SLC22A3基因的表达调控研究提供了理论依据。