应用4℃冰箱分离B型流感病毒

作     者：郑勤妮 万永虎 庄丽 李世军 唐光鹏 王昭孝 Zheng Qinni;Wan Yonghu;Zhuang Li;Li Shijun;Tang Guangpeng;Wang Zhaoxiao

作者机构：贵州省疾病预防控制中心传防所检验科贵州省贵阳550004 

出 版 物：《中国基层医药》 (Chinese Journal of Primary Medicine and Pharmacy)

年 卷 期：2015年第22卷第11期

页      面：1623-1626,J0001页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：贵州省疾病预防控制中心基金(2013-E2-3) 

主　　题：MDCK细胞 B型流感病毒 分离 增殖 

摘      要：目的探索低温保存狗肾细胞（MDCK）对B型流感病毒分离和增殖的影响。方法复苏冻存的P17代MDCK细胞，传至2～4代后，选择生长状态及形态良好的单层细胞，换新鲜细胞生长液，于4oC保存3d、6d、9d后，在相同培养条件下同时接种流感样病例咽拭子标本。上毒24h后每天观察细胞病变，采用实时荧光PCR相对定量法测定病毒的增殖率，血清学试验测定病毒血凝效价，同时以同一代次常规培养的MD-CK细胞单层为对照。结果（1）细胞病变：与对照相比较，4℃低温保存3、6d的细胞细胞病变无差别，而保存9d的细胞细胞病变快，维持时间短。（2）荧光定量：4℃低温保存3、6d的细胞对流感病毒的增殖（25.86×10^5～30．25×10^6、26．31×10^5～30．54×10^6）与常规分离（24．82×10^5～29．86×10^6）相比无差别，其增值率在10^5～10^6倍之间。而9d的细胞（19．72×10^4～28．34×10^5）则较对照要低，增值率在10^4～10^5倍之间。（3）HA效价：4℃保存3d和6d的细胞分离病毒血凝效价大于1：16的毒株数与常规细胞（10．92±0．79）比较，差异无统计学意义（P〉0．05），而保存9d的细胞分离病毒血凝效价大于1：16的毒株数较正常细胞低并有统计学意义（P〈0．01）。结论4℃低温保存1周内MDCK细胞单层对B型流感病毒的分离和增值无影响。