SIAH1介导TRB3的泛素化和降解

作     者：周颖 侯树勋 张令强 ZHOU Ying;HOU Shuxun;ZHANG Lingqiang

作者机构：中国人民解放军总医院第一附属医院全军骨科研究所北京市100048 北京放射与辐射医学研究所北京市100850 

出 版 物：《医学分子生物学杂志》 (Journal of Medical Molecular Biology)

年 卷 期：2011年第8卷第1期

页      面：7-10页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金(No.30800584) 

主　　题：蛋白-蛋白相互作用 TRB3 SIAH1 泛素-蛋白酶体途径 

摘      要：目的利用酵母回转实验和免疫共沉淀实验验证SIAHI和TRB3之间的相互作用并探讨其功能相关性。方法将全长形式的TRB3基因和SIAH1基因分别克隆入酵母表达载体pDBLeu和pPC86中，共转化至MaV203酵母感受态细胞，验证其相互作用，然后分别构建至真核表达载体pCMV—Myc和pFLAG—CMV-2中，采用免疫共沉淀实验进行进一步验证。通过体内泛素化实验检测SIAH1对TRB3蛋白稳定性及泛素化修饰的影响。结果通过在酵母细胞中的回转实验和HEK293rr细胞中的免疫共沉淀实验证实了TRB3与SIAH1之间的相互作用。通过体内泛素化实验证实了S1AH1介导了TRB3的泛素化修饰和降解。结论证实了TRB3与SIAH1之间的相互作用并发现SIAH1介导了TRB3的泛素化修饰和降解，为TRB3蛋白的功能研究提供了新的线索。