直接PCR法在口腔牙龈卟啉单胞菌检测中的应用

作     者：谷变利 王娟萍 孔金玉 刘雅莉 张灏 詹启敏 高社干 GU Bian-li;WANG Juan-ping;KONG Jin-yu;LIU Ya-li;ZHANG Hao;ZHAN Qi-min;GAO She-gan

作者机构：河南科技大学临床医学院河南科技大学第一附属医院河南科技大学肿瘤研究所河南省肿瘤表观遗传重点实验室河南洛阳471003 河南科技大学第一附属医院健康管理中心河南洛阳471003 河南省医学情报研究所河南郑州450046 暨南大学医学院肿瘤精准医学与病理研究所广东广州510632 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室北京100021 

出 版 物：《食管疾病》 (Journal of Esophageal Diseases)

年 卷 期：2020年第2卷第1期

页      面：38-42页

学科分类：10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81972571) 河南省卫健委联合共建项目(2018020299) 

主　　题：食管癌 牙龈卟啉单胞菌 直接PCR 分子流行病学 

摘      要：目的为了便于食管癌大规模流行病学筛查工作的开展,探讨一种能快速敏感地检测口腔牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)DNA的免核酸抽提直接PCR方法。方法收集我院门诊100例体检人员的200份口腔拭子(每人双份),以TE buffer(10 mM Tris,0.1 mM EDTA,pH 8.0)、商品化裂解液以及核酸抽提试剂盒等作为基因组提取试剂,使用***特异引物探针进行直接定量PCR检测。结果与裂解液-直接qPCR法相比,TE-直接qPCR法的灵敏度为94.12%,特异性为100%;与试剂盒-qPCR法相比,TE-直接qPCR法的灵敏度与特异性均为100%;TE-直接qPCR法与裂解液-直接qPCR法以及与试剂盒-qPCR法检测***均具有高度一致性(分别为Kappa=0.954,Kappa=1);TE-直接qPCR法与试剂盒-qPCR法检测阳性***的Ct均值无显著差异(P=0.907)。结论TE-直接qPCR法检测口腔***灵敏度高、特异性强,是快速高效检测口腔***的理想方法,可用于食管癌大规模分子流行病学研究。