弓形虫棒状体蛋白2和膜表面蛋白1融合基因的克隆与表达

作     者：李文姝 陆惠民 闵太善 黄伟达 LI Wen-shu;LU Hui-min;MIN Tai-shan;HUANG Wei-da

作者机构：温州医学院微生物免疫学教研室温州325032 苏州大学医学院苏州215006 复旦大学生物化学与分子生物学实验室上海200433 

出 版 物：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 (Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases)

年 卷 期：2005年第23卷第6期

页      面：415-418页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 0906[农学-兽医学] 100102[医学-免疫学] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主　　题：弓形虫 棒状体蛋白 膜表面蛋白1 克隆 表达 

摘      要：目的进行弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)融合基因的克隆与表达,为弓形虫ROP2-P30基因工程复合抗原的制备做准备。方法半套式PCR扩增编码弓形虫P30的基因片段,克隆至已构建成功的重组质粒pUC119/ROP2中,经PCR和酶切鉴定正确的重组质粒pUC119/ROP2-P30再以SacⅠ/HindⅢ双酶切克隆至表达载体pET28b上,鉴定正确的重组质粒pET28b/ROP2-P30转化大肠埃希菌表达菌株BL21-Codon Plus(DE3)-RIL,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出700 bp P30基因片段,成功构建重组质粒pET28b/ROP2-P30,该质粒经PCR和酶切鉴定,与预期结果一致,并在大肠埃希菌中高效表达,产生相对分子质量(Mr)约为69 000的重组目的蛋白。结论弓形虫ROP2和P301融合基因克隆成功,并表达出预期的复合重组蛋白ROP2-P30。