猪圆环病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中表达形成病毒样颗粒的研究

作     者：李玲 李国新 徐彦召 高景鹏 周艳君 童光志 

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2011年第19卷第5期

页      面：15-20页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主　　题：猪圆环病毒 昆虫细胞表达系统 重组杆状病毒 病毒样颗粒 

摘      要：本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)PCV2b的ORF2基因插入供体质粒pFastBacTMⅠPPH启动子控制下的多克隆位点,构建的质粒转化DH10BAC感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-cap。将rBacmid-cap转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,间接免疫荧光试验证明目的蛋白在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得了表达。将该重组杆状病毒感染HighFiveTM细胞后,用Western blot在细胞培养上清中检测到了目的蛋白,并于d 5达到表达高峰。电镜观察结果显示上清中的目的蛋白可以装配成直径约为17 nm的病毒样颗粒。病毒样颗粒在培养上清中的大量存在,为目的蛋白进一步的分离和纯化提供了便利,也为PCV2基因工程疫苗的产业化奠定了基础。