利用Hsp基因调控元件构建胞内表达的***-BCG穿梭载体

作     者：史皆然 李元 戚好文 李别虎 范雄林 

作者机构：第四军医大学西京医院呼吸内科西安710032 第四军医大学西京医院微生物学教研室西安710032 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2003年第23卷第8期

页      面：629-632页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主　　题：穿梭载体 E-coli-BCG 多聚酶链式反应 结核分枝杆菌 卡介苗 

摘      要：目的 构建能够携带外源蛋白基因并能在胞内表达的E .coli BCG (BacilleCalmette Guerin)穿梭载体。方法 用多聚酶链式反应 (PCR)从结核分枝杆菌毒株H37Rv基因中扩增出结核分枝杆菌热休克蛋白 (Hsp) 6 0N端 6个氨基酸及其上游调控元件基因 ,克隆入E .coli BCG穿梭载体pOLYG中 ,以屋尘螨抗原 (Derp2 )为外源蛋白 ,用间接免疫荧光染色法观察该载体介导的Derp2基因在牡牛分枝杆菌 (M .vaccae)宿主中的表达。结果 经测序证实所克隆的Hsp6 0ss基因序列正确 ,所构建的胞浆内表达E .coli BCG穿梭载体 (pIC)能完成在大肠杆菌和M .vaccae细胞之间的穿梭 ,并介导抗生素抗性基因的表达 ,经免疫荧光检查外源基因Derp2可表达于M .vaccae宿主胞内 ,并受到培养温度的调节。结论 成功构建了在M .vaccae胞内表达外源蛋白的E .coli BCG穿梭载体。