铁皮石斛HDR基因克隆及真菌诱导子对其表达和生物碱含量的影响

作     者：林艳君 赖钟雄 LIN Yanjun;LAI Zhongxiong

作者机构：福建农林大学园艺植物生物工程研究所福建福州350002 

出 版 物：《热带作物学报》 (Chinese Journal of Tropical Crops)

年 卷 期：2015年第36卷第4期

页      面：680-686页

学科分类：090706[农学-园林植物与观赏园艺] 0907[农学-林学] 09[农学] 

基　　金：福建省科技厅农业科技平台建设项目(No.2008N2001) 

主　　题：铁皮石斛 Do-HDR基因 基因克隆 qPCR 生物碱 

摘      要：以铁皮石斛原球茎为材料,采用同源克隆的方法,成功得到了铁皮石斛Do-HDR基因的全长,并通过q PCR对其相对表达量进行分析。结果表明:Do-HDR基因全长1 784 bp(Gen Bank登录号KJ946381),5′UTR为40 bp,3′UTR为361 bp,开放阅读框为1 382 bp,编码460个氨基酸。生物信息学分析结果表明,该基因编码的蛋白为稳定的亲水蛋白,不具有跨膜结构,不含信号肽,定位于内质网。采用灭活的尖孢镰刀菌菌液作为诱导子,分别以0、100、200、500、1 000 mg/L的浓度培养3 d后测定总生物碱含量,结果表明,总生物碱含量呈现先上升后下降的趋势;当诱导子浓度为200 mg/L时,总生物碱含量达到最大值。在此基础上通过q PCR分析Do-HDR基因的相对表达量,结果发现Do-HDR基因相对表达量在诱导子浓度为200 mg/L时也到达最大值。因此,推测Do-HDR基因与生物碱的合成与积累有关。