A型肉毒毒素重链在大肠杆菌中的厌氧表达

作     者：韦娜 付楚溪 汪建华 熊向华 张惟材 WEI Na;FU Chu-Xi;WANG Jian-Hua;XIONG Xiang-Hua;ZHANG Wei-Cai

作者机构：军事科学院军事医学研究院生物工程研究所 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2019年第30卷第6期

页      面：751-755页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家科技重大专项(2018X09J18105-003) 

主　　题：A型肉毒毒素 重链 大肠杆菌 厌氧条件 

摘      要：目的:用大肠杆菌表达可溶性A型肉毒毒素(BoNT/A)重链。方法:按大肠杆菌偏好密码子设计合成重链N端(HN)编码序列,重叠延伸PCR连接HN和重链C端(HC)构成重链基因;将重链基因构建至pTIG-TrxA载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),厌氧培养与好氧培养分别诱导表达重链;SDS-PAGE比较表达条带,ELISA比较不同表达条件的重链表达水平。结果:测序结果表明正确设计合成了HN编码序列;SDS-PAGE结果显示重链厌氧表达条带的相对分子质量与预期一致,好氧表达条带的相对分子质量比预期小;定性ELISA结果显示静置培养表达的重链活性远远高于摇床培养。结论:BoNT/A重链在大肠杆菌中厌氧条件下表达活性明显高于好氧表达,为厌氧生物蛋白在大肠杆菌中的表达提供了新思路。