丙泊酚通过促进小泛素化相关修饰蛋白1表达增加抑制神经母细胞瘤细胞系钙内流水平变化
Propofol inhibits calcium influx by promoting protein sumoylation in neuroblastoma cell lines作者机构:上海交通大学医学院附属瑞金医院麻醉科上海200025
出 版 物:《上海医学》 (Shanghai Medical Journal)
年 卷 期:2013年第36卷第10期
页 面:823-827页
学科分类:1002[医学-临床医学] 100217[医学-麻醉学] 10[医学]
主 题:丙泊酚 小泛素化相关修饰蛋白化修饰 神经母细胞瘤细胞系 钙内流 全身麻醉机制
摘 要:目的立足于小泛素化相关修饰蛋白(SUMO)化修饰这一蛋白质翻译后修饰的全新角度,通过研究丙泊酚对细胞蛋白SUMO化修饰和钙内流的变化探讨丙泊酚的全身麻醉机制。方法采用Western印迹法观察丙泊酚对神经母细胞瘤细胞系(SHSYSY)SUM01化水平变化的影响。并通过脂质体转染法将SUMO特异性蛋白酶(SENP)1导入3×Flag—SUMOlSHSY5Y细胞系降低SUM01化水平,以观察丙泊酚对细胞钙内流变化的影响。采用Fluo一3AM钙离子荧光测定法测定细胞内钙离子浓度。结果以50“mol/L丙泊酚分别孵育3×Flag—SUM01一SHSY5Y细胞系0、30、60、120rain,随着处理时间的延长,SUMO化水平升高,且与蛋白结合状态的SUMO增加,游离态SUMO减少。以5、10、25、50ffmol/L丙泊酚孵育细胞60rain,细胞蛋白SUMO化水平随丙泊酚浓度增加而升高。临床浓度丙泊酚(50Ⅱtool/L)引起细胞钙内流呈双向性变化,在加入丙泊酚的最初数分钟,细胞内钙离子迅速增加,约10~15min达到峰值,后逐渐降低,以45~60min为转折点,随后逐渐低于对照组,与细胞内SUMO化水平变化趋势相同。与0umol/L相比,50、37.5、25ffmol/I。丙泊酚作用60min后细胞内钙离子荧光值显著降低(P值均d0.05),细胞内钙离子浓度明显受到抑制。转入野生型SENPl的细胞中丙泊酚(50~mol/L)对其钙内流影响的双向性消失,细胞内钙离子荧光值与溶剂对照组的差异无统计学意义(P〉O.05);而在表达突变体SENPl和空载体的细胞中,丙泊酚对钙内流的抑制性影响仍然存在,细胞内钙离子荧光值均显著低于溶剂对照组(P值均d0.05)。结论丙泊酚通过诱导3×Flag—SUM01一SHsY5Y细胞系SUMO化水平表达增加抑制细胞钙内流变化,这也许是丙泊酚发挥抑制效应的全身麻醉机制之一。