蜡样芽孢杆菌胶原蛋白酶基因的异源表达与活性分析

作     者：刘丽莉 杨陈柳 尤晓颜 李玉 梁严予 Liu Lili;Yang Chenliu;You Xiaoyan;Li Yu;Liang Yanyu

作者机构：河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471023 食品加工与安全国家级教学示范中心河南洛阳471023 

出 版 物：《中国食品学报》 (Journal of Chinese Institute Of Food Science and Technology)

年 卷 期：2020年第20卷第1期

页      面：69-75页

核心收录：

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083203[工学-农产品加工及贮藏工程] 

基　　金：国家自然科学基金项目(201303084,U1704114) 河南省重点攻关项目(182102110346) 河南省重大专项(161100110900,161100110600-2,161100110700-2,161100110800-06) 

主　　题：蜡样芽孢杆菌MBL13-U 胶原蛋白酶 大肠杆菌 异源表达 活性分析 

摘      要：研究采用降解骨胶原蛋白的蜡样芽孢杆菌MBL13-U作为原菌种,并对蜡样芽孢杆菌MBL13-U进行全基因组测序,克隆获得胶原蛋白酶(ColM13)基因。将目的基因与大肠杆菌的表达载体pET30a进行连接,转入大肠杆菌宿主菌株BL21,获得降解骨胶原蛋白的工程菌pET30a-ColM13/BL21。通过SDS-PAGE测定异源表达的重组蛋白酶ColM13的分子质量,并测定不同诱导时间和诱导浓度对ColM13酶活性的影响,最终确定重组蛋白酶ColM13的酶活最适条件:6‰异丙基硫代半乳糖苷(IPTG,100 mmol/L),37℃诱导6 h,优化后酶活力最高为64.99 U/mL,较优化前提高4.24倍。通过水解圈试验、紫外光谱和扫描电子显微镜等方式验证,表明工程菌构建成功,这为我国畜禽骨骼资源的深度开发和综合利用提供了新的研究思路。