尼罗罗非鱼MyD88基因的表达及多克隆抗体制备

作     者：张永德 林勇 潘传燕 冯鹏霏 陈晓汉 罗洪林 ZHANG Yongde;LIN Yong;PAN Chuanyan;FENG Pengfei;CHEN Xiaohan;LUO Honglin

作者机构：广西水产科学研究院广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室 

出 版 物：《水产科学》 (Fisheries Science)

年 卷 期：2019年第38卷第5期

页      面：595-602页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071002[理学-动物学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31372553,31760765) 国家现代农业产业技术体系广西创新团队建设项目(Nycytxgxcxtd-08) 广西省重点实验室建设项目(16-380-38) 

主　　题：罗非鱼 MyD88 原核表达 多克隆抗体 

摘      要：为体外表达尼罗罗非鱼髓样分化因子(MyD88)蛋白并制备抗该蛋白的多克隆抗体,采用无缝克隆技术将尼罗罗非鱼MyD88基因转入pET-B2m原核表达载体,并转入大肠杆菌B21中诱导表达,将表达的MyD88蛋白经纯化后免疫大耳兔制备多克隆抗体,采用Western blot和ELISA检测抗体的特异性和效价。试验结果表明,本研究成功构建了pET-B2m-MyD88原核表达载体,诱导表达获得了48.9 ku的重组蛋白,免疫大耳兔获得效价为1∶2 048 000的抗尼罗罗非鱼MyD88多克隆抗血清。Western blot检测结果显示,该抗体能够特异性的识别原核表达的MyD88蛋白。原核表达体系的建立及多克隆抗体的制备为进一步研究MyD88蛋白在尼罗罗非鱼先天性免疫中的功能奠定了基础。