罗非鱼无乳链球菌Sip-Pgk融合蛋白乳酸菌口服疫苗制备及其免疫效果的研究

作     者：袁玉梅 石存斌 陶家发 张德锋 孙承文 巩华 黄志斌 赖迎迢 YUAN Yumei;SHI Cunbin;TAO Jiafa;ZHANG Defeng;SUN Chengwen;GONG Hua;HUANG Zhibin;LAI Yingtiao

作者机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室 

出 版 物：《南方水产科学》 (South China Fisheries Science)

年 卷 期：2019年第15卷第6期

页      面：9-18页

核心收录：

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

基　　金：广东省鱼病防治专项“罗非鱼养殖水体益生菌载体疫苗研究”(2016) 广州市科技计划项目(201904020004) 中国水产科学研究院基本科研业务费专项资金(2017HY-ZD0504) 中国水产科学研究院珠江水产研究所自主科技创新项目(ZC2019-8) 

主　　题：罗非鱼 无乳链球菌 乳酸菌疫苗 融合蛋白 免疫 

摘      要：为研制比无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)单个蛋白抗原免疫效果更佳的多蛋白重组罗非鱼(Oreochromis sp.)链球菌病口服疫苗,该研究利用同源重组法构建表达无乳链球菌Sip-Pgk融合蛋白的pNZ8148-sippgk质粒,通过电转化乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)NZ9000中获得*** NZ9000 pNZ8148-sip-pgk重组乳酸菌,使用nisin诱导表达并进行Western blot鉴定,制备Sip-Pgk融合蛋白乳酸菌口服疫苗,通过不同免疫次数隔周免疫的方式灌胃罗非鱼。ELISA检测免疫后的血清抗体水平,在灌胃免疫结束后的第18天通过腹腔注射无乳链球菌攻毒获得相对免疫保护率。结果显示,构建的重组乳酸菌诱导表达的蛋白大小为92 kD,与目的蛋白大小一致。与2次免疫比较,3次免疫该融合蛋白乳酸菌疫苗能显著提高罗非鱼的血清抗体水平和对无乳链球菌的免疫保护效果。3次免疫Sip-Pgk融合蛋白乳酸菌疫苗的血清水平显著高于单一蛋白组和PBS组,其相对免疫保护率最高(45.56%)。