锤头状Ribozyme在修饰核苷酸ψ3′侧的定点剪切

作     者：吴晨衍 金由辛 王德宝 

作者机构：中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室上海200031 

出 版 物：《中国科学（B辑）》 (Science in China(Series B))

年 卷 期：1993年第23卷第12期

页      面：1267-1271页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：国家"863"高科技 国家自然科学基金 

主　　题：锤头结构 Ribozyme 核苷酸 

摘      要：现有知识所知道的锤头状Ribozyme结构中,剪切是在特殊位点的3′侧发生,我们将含GTΨ的酵母丙氨酸tRNA 3′半分子(40聚)作为底物,按Haseloff-Gerlach锤头结构模型设计了一个38聚的Ribozyme分子。在镁离子存在的条件下,GTΨ的3′侧发生预期的体外剪切反应。反应的米氏动力学参数为:K_m:6.7μmol/L,k_(cat):3.4×10^(-3)/min。与此同时,合成了一个17聚的底物类似物,仅以GUU代替上述的GTΨ序列。恒态动力学分析表明,两底物的K_m值大致相同,但k_(cat)值相差达294倍。实验表明,修饰核苷酸Ψ可以是Ribozyme锤头结构中的剪切位点,但具有很低的k_(cat)。