辣椒疫霉菌葡聚糖酶抑制蛋白的原核表达、纯化及结晶

作     者：王会征 兰玉彬 Wang Huizheng;Lan Yubin

作者机构：山东理工大学农业工程与食品科学学院/国家精准农业航空施药技术国际联合研究中心山东理工大学分中心 

出 版 物：《山东农业科学》 (Shandong Agricultural Sciences)

年 卷 期：2019年第51卷第10期

页      面：111-116页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：山东省引进顶尖人才“一事一议”专项经费资助项目 淄博市科技发展计划资助项目(2018kj010073) 

主　　题：辣椒疫霉菌 葡聚糖酶抑制蛋白(GIP) 原核表达 纯化 结晶 

摘      要：葡聚糖酶抑制蛋白(GIP)是辣椒疫霉菌在病理环境下诱导产生的一类蛋白,是病原菌抗性蛋白的一种。本研究根据辣椒疫霉菌全基因组序列,通过生物信息学分析、序列比对获得葡聚糖酶抑制蛋白全长基因序列。以辣椒疫霉高致病菌株SD33全基因组为模板扩增GIP基因cDNA,并对其进行相关生物信息学分析。基因经测序验证后与载体pET28a(+)连接,构建好的重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli Rosetta),用IPTG诱导表达重组蛋白6×His-GIP。重组蛋白在5mol/L尿素变性环境下进行亲和层析纯化,对纯蛋白进行透析、复性、浓缩后进行分子排阻层析纯化,并对获得的纯蛋白进行蛋白结晶试验,为进一步阐明GIP作用机理奠定基础。