Asia1型口蹄疫病毒3B蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

作     者：刘华南 杨帆 杨华 吕律 曹伟军 石正旺 岳城 郑海学 才学鹏 

作者机构：新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2015年第45卷第12期

页      面：1225-1230页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)项目(2011AA10A211-1) 甘肃省高层次人才科技创新创业扶持行动项目(1013JHTA008) 国际原子能机构项目(16025/R) 

主　　题：口蹄疫病毒 3B蛋白 单克隆抗体 

摘      要：为了获得Asia1型口蹄疫病毒非结构蛋白3B的单克隆抗体,以含Asia1型FMDV/JS/05毒株3B基因的pCAGGS-3B质粒为模板,扩增3B蛋白基因,并克隆至pET-30a（＋）载体,进行原核表达及纯化。分别以Asia1型口蹄疫病毒、纯化的3B蛋白为抗原,免疫4~6周龄的雌性BALB/c小鼠,经过4次免疫后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞按5∶1~10∶1进行细胞融合,用本实验室建立的间接ELISA对融合后的细胞进行筛选,并进行4次有限稀释筛选出的阳性细胞扩大培养后,注射小鼠腹腔,制备腹水。对制备的腹水进行类别鉴定、反应原性和效价鉴定。结果表明,获得1株能稳定分泌抗Asia1型口蹄疫病毒3B蛋白的细胞株,其抗体类别为IgM,腹水效价为1∶12 800,通过Western-blot和间接免疫荧光试验,确定其能识别口蹄疫病毒3B蛋白。