定点饱和突变改善米曲霉木聚糖酶的温度特性

作     者：吴芹 臧嘉 胡蝶 王瑞 邬敏辰 WU Qin;ZANG Jia;HU Die;WANG Rui;WU Minchen

作者机构：江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122 

出 版 物：《食品与生物技术学报》 (Journal of Food Science and Biotechnology)

年 卷 期：2019年第38卷第7期

页      面：65-70页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31271811) 

主　　题：定点饱和突变 木聚糖酶 温度特性 分子动力学模拟 B-factor值 

摘      要：为改善米曲霉木聚糖酶AoXyn11A的温度特性,基于其三维结构的同源建模和分子动力学模拟,随机替换最高B-factor值位点处的Gly21。以重组表达质粒pET-28a-Aoxyn11A为模板,采用全质粒两步PCR技术对AoXyn11A基因(Aoxyn11A)中编码Gly21的密码子实施饱和突变,将pET-28a-Aoxyn11A各突变体转化*** BL21(DE3),构建了突变转化子文库。以酶的热稳定性为指标,从文库中筛选出最优突变转化子(***/Aoxyn11AG21I)。DNA测序结果显示,***/Aoxyn11AG21I表达一种由Ile21替换了Gly21的突变酶AoXyn11AG21I。温度特性分析表明:突变酶的最适温度由突变前的55℃提高至65℃;AoXyn11AG21I在55℃及以下稳定,较AoXyn11A提高了7℃。另外,AoXyn11A突变前后的pH特性改变不大。