谷氨酸生产菌S^(9114)中的谷氨酸脱氢酶的研究

作     者：王燕 宋香 杨平平 段作营 毛忠贵 WANG Yan 1,2 SONG Xiang 1 YANG Ping-Ping 1 DUAN Zuo-Ying 1 MAO Zhong-Gui 1* 1(School of Biotechnology, Southern Yangtze University;the Key Laboratory of Industry Biotechnology, Ministry of Education, Wuxi 214036, China) 2(Department of Food Engineering, the Light-industry Institute of Shandong, Jinan 250100,China)

作者机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2003年第19卷第6期

页      面：725-729页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

主　　题：谷氨酸脱氢酶 提纯 谷氨酸棒杆菌 NADH NADPH 谷氨酸 生产菌 

摘      要：谷氨酸脱氢酶 (GDH)是谷氨酸生物合成的关键酶 ,谷氨酸棒杆菌S91 1 4是目前我国味精工业应用最广泛的生产菌种 ,其谷氨酸脱氢酶的研究尚未见报道。分离纯化该菌中的谷氨酸脱氢酶 ,研究其辅酶组成 ,对揭示谷氨酸脱氢酶的分子结构和性质 ,提高谷氨酸产率很有必要。将培养至对数期中期的细胞离心收集并用含适量DTT、ED TA的Tris_HCl缓冲液 (pH 7 5 )洗涤 ,用Frenchpressurecellpress破碎 ,离心去除菌体碎片得无细胞抽提液。然后使用 KTA_10 0快速纯化系统经DEAE_纤维素柱、疏水柱 (HIC)、G_2 0 0凝胶过滤柱层析得到纯化大约 70倍的以NAD PH为辅酶的GDH和部分纯化的以NADH辅酶的GDH。这两个酶分别对NADPH、NADH高度专一 ,不能相互代替。经HPLC和SDS_PAGE测得前一种酶的分子量和亚基分子量分别为 188kD和 32kD ,表明该酶为具有相同亚基的六聚体。酶活性测定使用HITACHIU_30 0 0分光光度计利用NAD(P)H在 340nm氧化的初速度进行。蛋白质含量测定利用Bradford方法进行 ,并以牛血清白蛋白为标准蛋白。纯化结果表明S91 1 4中确实存在两种GDH ,其中以NADH为辅酶的GDH尚未见报道。和某些具有两种GDH的微生物一样 ,S91 1 4可能也是以NADPH为辅酶的GDH参与谷氨酸的合成代谢 ,以NADH为辅酶的GDH参与谷氨酸的分解代谢。