中华蜜蜂王浆多肽Apisimin基因转录、克隆与表达研究

作     者：邢丽苹 沈立荣 乌晓云 施婉君 高其康 程家安 张传溪 XING Li-ping;SHEN Li-rong;WU Xiao-yun;SHI Wan-jun;GAO Qi-kan;CHENG Jia-an;ZHANG Chuan-xi

作者机构：浙江大学昆虫科学研究所杭州310029 上海交通大学资源环境科学系上海20110 

出 版 物：《上海交通大学学报（农业科学版）》 (Journal of Shanghai Jiaotong University(Agricultural Science))

年 卷 期：2006年第24卷第5期

页      面：460-464,470页

学科分类：0710[理学-生物学] 0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 08[工学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30271008) 

主　　题：王浆多肽 中华蜜蜂 序列分析 原核表达 

摘      要：构建中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂头部cDNA文库并进行了测序,从8568个表达序列标签(expression sequencetag,EST)中获得96个Apisimin基因克隆,结果表明Apisimin基因是一个高丰度转录的基因。进一步对克隆分析表明该基因cDNA全长为379 nt,包含一个237 nt、可以编码78个氨基酸的ORF。推导的Apisimin蛋白N端含有一个由24个氨基酸残基组成的信号肽,后端为54残基、预计分子量为5.9kDa的成熟肽。该ORF与意大利蜜蜂和印度蜜蜂的Apisimin基因核苷酸同源性分别为100%和95%。将成熟肽编码区进行亚克隆,构建了Apisimin与谷胱甘肽转移酶融合表达的载体pGEX/apisimin,并将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达。SDS-PAGE和薄层扫描表明,表达的融合蛋白分子量为31 kDa,表达量占细菌总蛋白的22.1%,约50%是可溶性的。通过亲和柱进一步纯化了表达的融合蛋白。