抗人血栓调节蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

作     者：郭紫芬 何淑雅 朱炳阳 严鹏科 李斌元 廖端芳 GUO Zi-Fen;HE Shu-Ya;ZHU Bing-Yang;YAN Peng-Ke;LI Bin-Yuan;LIAO Duan-Fang

作者机构：南华大学药物药理研究所 南华大学生化教研室衡阳421001 

出 版 物：《生理学报》 (Acta Physiologica Sinica)

年 卷 期：2006年第58卷第4期

页      面：391-396页

核心收录：

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：This work was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30470719) and the Key Programme of Public Health Department of Hunan Province(No.Z02-08) 

主　　题：血栓调节蛋白 表达 单克隆抗体 

摘      要：为了制备特异性抗人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,hTM)的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),利用脂质体Lipofectamine 2000将包含hTM全长cDNA序列的重组表达质粒pThr402转染CHO细胞,经G418筛选及相关鉴定后获得高效稳定表达hTM的CHO-TM5细胞株。将CHO-TM5细胞直接免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术,通过细胞ELISA (cellular enzyme-linked immunoabsorbent assay,CELISA)筛选出阳性克隆后,将杂交瘤细胞株腹腔注射Balb/c小鼠诱生腹水。用CELISA、流式细胞术、免疫组织化学染色法及免疫印迹法对所获McAb的特异性进行鉴定。我们获得了1株可稳定分泌抗hTM的McAb的杂交瘤细胞株NH-1,其亚型为IgGl,McAb腹水效价为1×10^(-6),腹水抗体含量为20 mg/ml。NH-1对相应抗原具有较高的组织特异性,在体内与正常组织的交叉反应少,对人脐静脉内皮细胞、CHO-TM5有特异性结合反应,说明NH-1可特异性识别天然的hTM分子,为进一步应用此McAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了基础。