真菌嵌合体植酸酶的构建及其抗蛋白酶水解特性研究
Construction of Chimerical Fungal Phytase and its Resistance to Proteolysis作者机构:四川大学生命科学学院四川成都610064 广东省农业科学院畜牧研究所广东广州510640
出 版 物:《中山大学学报(自然科学版)》 (Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni)
年 卷 期:2008年第47卷第4期
页 面:72-76,87页
核心收录:
学科分类:08[工学] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程]
基 金:国家自然科学基金资助项目(30200197) 广东省自然科学基金资助项目(990508)
摘 要:在烟曲霉植酸酶(Afp)的基因上,通过PCR逐步将编码1—47、178—237及338—381多肽序列的DNA片段置换为黑曲霉NRRL3135植酸酶(Anp)中的对应片段,构建了3个嵌合体(嵌合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ)基因,并在毕赤酵母中将其成功表达及纯化。所有的嵌合体和亲本植酸酶均能抵抗胃蛋白酶。在m(胰蛋白酶)/m(植酸酶)为0.1时,Anp完全失活;但Afp与所有嵌合体的活性仅损失13%-23%。胰蛋白酶水解产物的SDS—PAGE结果显示嵌合体Ⅱ与Ⅲ也能被胰蛋白酶严重水解,但非变性PAGE结果却表明它们在水解后仍能保持结构完整。嵌合体也具有一些与Anp及Alp相异的新pH曲线及耐热性。实验表明,通过替换基因片段改良真菌植酸酶可行。