南极冰藻Chlamydomonas ***-L的cDNA文库构建及品质检测

作     者：王能飞 沈继红 金治平 赵爱云 林学政 WANG Neng-fei;SHEN Ji-hong;JIN Zhi-ping;ZHAO Ai-yun;LIN Xue-zheng

作者机构：国家海洋局第一海洋研究所 清华大学生物系北京100084 青岛大学天然色素研究所山东青岛266071 

出 版 物：《海洋科学进展》 (Advances in Marine Science)

年 卷 期：2006年第24卷第4期

页      面：520-525页

学科分类：0710[理学-生物学] 071001[理学-植物学] 07[理学] 

基　　金：国家自然科学基金项目--南极冰藻抗冻蛋白的研究(40306027) 青岛市自然科学基金项目--极端环境下南极冰藻抗逆基因的研究(05-2-JC-56) 国家海洋局青年基金项目--南极冰藻抗逆藻种的筛选和cDNA文库构建(2006103) 中国极地科学战略研究基金--南极海冰区藻类对气温升高的适应性研究 

主　　题：PCR 南极冰藻 Ribosomal protein S5 cDNA文库 

摘      要：为构建南极冰藻Chlamydomonas ***-L的cDNA文库，提取对数生长期南极冰藻ICE-L的总RNA，以此为模板，通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA；再以第一链cDNA产物为模板，用LD-PCR合成第二链cDNA。该cDNA产物经分级分离转入大肠杆菌中，即获得南极冰藻IcBL的cDNA原始文库，其滴度为1．6×10^6 cfu／mL。扩增后的cDNA文库的滴度为1．0×10^10 cfu／mL。用PCR方法测得文库的重组率大干97％，插入cDNA的长度为0．5～1．8kb，0．9kb以上插入片段占50％以上。取适量扩增文库稀释并铺平板，挑取72个独立菌落，对其中22个独立菌落所插入的cDNA进行测序，克隆到了一个具有5’和3’非编码区的40S ribosomal protein S5全长基因序列，GenBank收录号为AM167929。