大鼠Sirt1基因原核表达质粒的构建及融合蛋白表达

作     者：耿义群 傅玉才 徐小虎 王伟 许锦阶 

作者机构：汕头大学医学院法医学教研室广东汕头515041 汕头大学医学院细胞衰老实验室 

出 版 物：《中国老年学杂志》 (Chinese Journal of Gerontology)

年 卷 期：2007年第27卷第5期

页      面：417-419页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

主　　题：大鼠 Sirt1 基因表达 重组蛋白 

摘      要：目的构建大鼠Sirt1基因重组原核表达质粒pET41-Sirt1,表达其重组蛋白,为进一步研究Sirt1在哺乳动物细胞内的作用奠定基础。方法根据GenBank中大鼠Sirt1基因序列设计引物,用RT-PCR扩增得到含BamHI/XhoI酶切位点的Sirt1片段,克隆至pGEM-Teasy载体后亚克隆至原核表达载体pET41,测序鉴定后,转化宿主菌进行表达、蛋白纯化,SDS-PAGE鉴定。结果从大鼠脑的mRNA中扩增出特异Sirt1基因片段长506bp,经酶切鉴定及DNA序列测定,证实pET41-Sirt1重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为48kD。结论成功构建重组原核表达质粒pET41-Sirt1,并能表达融合蛋白,其分子量大小与预期一致。