内源性表达白细胞介素21的CIK细胞的抗白血病作用及其机制
Effects and mechanism on anti-leukemic activity of cytokine-induced killer cells with an endogenousexpression of interleukin-21作者机构：天津医科大学一中心临床学天津300192 天津市第一中心医院血液科
出 版 物：《中华医学杂志》 (National Medical Journal of China)
年 卷 期：2013年第93卷第4期
页 面：293-299页
核心收录：
学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
基 金：国家自然科学基金(81041043) 教育部留学归国人员科研启动基金(教外司留1108) 天津币卫生局科技基金重点项目(2011KR01)
主 题：白血病 细胞因子诱导杀伤细胞 白细胞介素21 抗白血病作用
摘 要：目的研究内源表达白细胞介素2l（IL-21）对外周血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）抗自血病的作用及其作用机制。方法采集分离健康人外周血单个核细胞，加用细胞因子诱导培养CIK细胞，构建表达IL-21基因的慢病毒载体，感染CIK细胞并鉴定后，四甲基偶氮唑盐（Mqq＂）法检测CIK细胞的增殖能力及杀伤白血病细胞系K562细胞作用；半定量反转录（RT）-PCR法检测CIK细胞干扰素1（IFN-y）、肿瘤坏死因子0（***）、TNF．B、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、Fas配体（FasL）和NKG2D分子（NKG2D）的mRNA表达；流式直接免疫标记法检测CIK细胞免疫表型、细胞表面IL-21受体（IL．21R）、FasL及细胞内穿孔素、颗粒酶B的表达；酶联免疫法检测培养上清中IFN-^v和TNF-OL的表达。结果经酶切与测序鉴定，IL-21慢病毒载体构建正确，共转染CIK细胞中有目的基因IL-21的表达。（1）与空载体组相比，内源表达IL-21组总的细胞增殖之间差异无统计学意义（P=0．856），内源表达IL-21组CIK细胞阳性细胞数高于空载体组（24．60％±2．10％比16．95％±4．70％，P=0．042）。（2）内源表达IL．21组CIK细胞对K562细胞的杀伤率高于空载体组（58．4％±8．3％比23．3％±2．8％，P=0．009），作用第5天时，杀伤作用仍能维持在61．2％±6．2％（P：0．003），相比外源性IL-21作用的CIK细胞的杀伤率（44．6％±8．3％比22．8％±2．8％，P=0．034）更强，而且作用时间更长久。（3）内源表达IL-21组CIK细胞表面IL-21R的表达比空载体组增加约2倍。（4）与空载体组比较，内源表达IL-21组CIK细胞IFN--,／和TNF-仪mRNA的表达升高约1．5倍，穿孔素、颗粒酶B、FasLmRNA的表达量升高近2倍，颗粒酶A、TNF-B和NKG2DmRNA的表达与空载体组差异无统计学意义。（5）对mRNA表达差异有统计学意义的指标进-步行蛋白质表达的检测发现：内源表达IL-21组CIK细胞表面FasL、穿孔素、颗粒酶B、IFN-y、TNF-a的表达水平均高于空载体组0．56％±0．37％比0．06％±0．02％、25．86％±6．13％比12．23％-4-2．35％、37．58％±2．30％比14．56％±1．36％、（55．3±3．5）ng／L比（23．2±5．6）．g／L、（15．6±0．6）斗∥L比（5．6±0．6）μg／L，均P〈0．05]。结论内源表达IL，21的CIK细胞具有更强的抗白血病作用，而且作用时间更长久，此作用可能是通过增加其受体的表达，增加穿孔素、颗粒酶B、FasL、IFN-y和TNF-a.
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