表达HBx的肝前体细胞的小鼠肝内移植模型的构建

作     者：钟沁 张超 何雪梅 胡代曦 张锡峰 黄佳祎 冯涛 Zhong Qin;Zhang Chao;He Xuemei;Hu Daixi;Zhang Xifeng;Huang Jiayi;Feng Tao

作者机构：重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆3400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物研究中心重庆3400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆3400016 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2014年第36卷第24期

页      面：2451-2454页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81071770 81201679)~~ 

主　　题：乙型肝炎病毒X蛋白 肝前体细胞 绿色荧光蛋白 门静脉 小鼠模型 

摘      要：目的构建表达乙肝病毒X基因(HBx)的肝前体细胞,并经小鼠门静脉注射建立肝内移植模型,为进一步研究HBx对肝前体细胞的作用和影响及其在原发性肝癌发病机制中的作用奠定了基础。方法分别将表达HBx基因的重组腺病毒Ad-HBx-GFP和空载体Ad-GFP转染小鼠肝前体细胞,再经小鼠门静脉注射后3、7、14 d取血清和肝组织,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)变化情况,观察绿色荧光蛋白表达情况,免疫组织化学法观察HBx阳性染色,并取表达高峰在第7天的肝组织,进行Western blot法和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法分别检测HBx的蛋白及mRNA表达。结果成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型,绿色荧光蛋白表达量、免疫组化阳性细胞数量及血清ALT均在注射后第7天达到高峰,RT-PCR及Western blot均检测到第7天14-19/Ad-HBx-GFP组小鼠肝组织目的基因及蛋白的特异性表达,与14-19/Ad-GFP组及生理盐水注射组相比结果具有统计学差异。结论成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型,操作可靠,重复性好,效果稳定,不仅对探讨原发性肝癌的发生机制奠定了基础,也为肿瘤动物模型的构建提供了新的思路。