二硫键优化透明质酸介导的肝癌靶向纳米探针的制备及体外靶向作用

作     者：刘国顺 杨惠康 李雯曦 熊炜烽 黎蕾 谌丹丹 郭媛 江新青 Liu Guoshun;Yang Huikang;Li Wenxi;Xiong Weifeng;Li Lei;Chen Dandan;Guo Yuan;Jiang Xinqing

作者机构：华南理工大学第二附属广州第一人民医院放射科510180 华南理工大学第二附属广州第一人民医院老年病科510180 解放军184医院放射科江西省鹰潭市335000 

出 版 物：《中华放射学杂志》 (Chinese Journal of Radiology)

年 卷 期：2019年第53卷第7期

页      面：603-608页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 0703[理学-化学] 100214[医学-肿瘤学] 0702[理学-物理学] 1009[医学-特种医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81271665) 

主　　题：磁共振成像 二硫键 透明质酸 纳米探针 

摘      要：目的探讨二硫键优化透明质酸介导的肝癌靶向纳米探针的构建方法和理化性质,并评价对肝癌细胞治疗作用的体外生物学特性及MRI的可行性。方法利用点击化学反应将含二硫键的端炔基聚己内酯(alkyne-SS-PCL)与端叠氮基透明质酸(HA-N3)合成透明质酸-二硫键-聚己内酯(HA-SS-PCL),再通过透析方法将阿霉素(DOX)及超顺磁性氧化铁(SPIO)包载于HA-SS-PCL内核中,制成透明质酸-二硫键-聚己内酯@阿霉素/超顺磁性氧化铁(HA-SS-PCL@DOX/SPIO),测量其粒径、DOX及SPIO负载率。利用四唑盐比色法(MTT),以碱性磷酸盐(PBS)为对照组,评价HA-SS-PCL对人肝癌细胞HepG2及正常肝细胞LO2的安全性,透明质酸-聚己内酯@阿霉素/超顺磁性氧化铁(HA-PCL@DOX/SPIO)及HA-SS-PCL@DOX/SPIO对人肝癌细胞HepG2的细胞毒性。采用免疫荧光及流式细胞术观察HA-PCL@DOX/SPIO及HA-SS-PCL@DOX/SPIO组人肝癌HepG2细胞表面CD44受体表达情况。通过体外MRI成像,以PBS为对照组,观察SPIO浓度为10、20、40、80μg/ml时,HA-PCL@DOX/SPIO及HA-SS-PCL@DOX/SPIO纳米探针T2WI信号强度变化情况。两组间计量资料的比较采用t检验,多组间计量资料的比较采用单因素方差分析。结果成功构建纳米探针HA-SS-PCL@DOX/SPIO,其粒径为(126.9±6.3)nm,呈大小均一的球形结构,该纳米探针对DOX及SPIO负载率分别为61.4%、58.7%。MTT试验显示,HA-SS-PCL即使在浓度为500μg/ml时,HepG2及LO2细胞存活率仍80%;当DOX浓度为10.00μg/ml时,HA-PCL@DOX/SPIO组HepG2细胞存活率为66.6%,HA-SS-PCL@DOX/SPIO组HepG2细胞存活率为55.2%。免疫荧光及流式细胞检测HA-PCL@DOX/SPIO及HA-SS-PCL@DOX/SPIO组均具有较强的荧光,后者荧光强度更强,分别为139.70±8.52、245.06±13.21。体外MRI成像示HA-PCL@DOX/SPIO及HA-SS-PCL@DOX/SPIO较对照组其T2信号强度均有明显下降(F值分别为613.591、569.234,P均0.01),后者下降率更为显著。结论经二硫键优化透明质酸介导的肝癌靶向纳米探针理化性质优良,在体外细胞水平对人肝癌细胞HepG2具有较好的靶向性及MRI显像功能。