赤羽病病毒套式RT-PCR检测方法的建立与初步应用

作     者：张吉红 黄素文 闻伟刚 李如松 ZHANG Ji-hong;HUANG Su-wen;WEN Wei-gang;LI Ru-song

作者机构：宁波出入境检验检疫局浙江宁波315012 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2010年第42卷第6期

页      面：1-4页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：宁波检验检疫局科研项目(NO:甬K06-2005) 

主　　题：赤羽病病毒 套式 RT-PCR检测 RT-PCR方法 初步应用 detection nested RT-PCR 牛病毒性腹泻病毒 牛鼻气管炎病毒 特异扩增 特异性引物 特异性试验 敏感性试验 血清样品 模拟样品 流产胎儿 基因序列 基因片段 核酸含量 GenBank 

摘      要：根据GenBank中已发表的赤羽病病毒(AKAV)的S基因序列,设计了3条特异性引物,建立了检测AKAV的套式RT-PCR方法。特异性试验表明,该方法可以特异扩增出AKAV的S基因片段,但从牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)等13种对照病毒中均不能扩增出目的条带。敏感性试验表明,套式RT-PCR能够扩增10-5稀释度的病毒RNA(核酸含量约1.18 ng/μL),比普通RT-PCR高出1 000倍。用此方法检测130份奶牛血清样品与1份流产胎儿病料,均未检测到阳性样本,但AKAV在血清模拟样品中可被有效检出。研究结果表明,该方法灵敏、特异,为AKAV的检测提供了一个快速、有效的手段。