miR-17-5p靶向自噬相关蛋白ATG7调控巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染作用的研究

作     者：洪丹彤 张帆 王淑娥 王红霞 刘昆梅 徐广贤 霍正浩 郭乐 HONG Dan-tong;ZHANG Fan;WANG Shu-e;WANG Hong-xia;LIU Kun-mei;XU Guang-xian;HUO Zheng-hao;GUO Le

作者机构：宁夏医科大学临床医学院银川7500212 宁夏医科大学总医院宁夏临床病原微生物重点实验室银川750021 宁夏医科大学颅脑疾病重点实验室银川750021 宁夏医科大学基础医学院宁夏生殖与遗传重点实验室银川750021 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2019年第39卷第6期

页      面：1-8页

核心收录：

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(81760359、31600744) 宁夏高等学校科学研究项目(NGY2017088)资助项目 

主　　题：自噬 结核分支杆菌 miR-17-5p ATG7 

摘      要：目的:通过研究miR-17-5p对自噬相关基因ATG7的靶向调控机制和对细胞自噬的作用,探究miR-17-5p在结核分枝杆菌介导的自噬途径中的作用及其机制。方法:生物信息学分析得到miR17-5p的靶基因ATG7,通过成功构建载体ATG7野生型(pMirGLO-ATG7-3 UTR-WT)和突变型,利用双萤光素酶报告系统、Western blot验证miR-17-5p和ATG7的靶向关系,同时构建结核分枝杆菌(H37Ra)感染的人源性THP-1巨噬细胞模型,将做不同处理的细胞分为三组:miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor、miR-17-5p nc。通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测H37Ra感染对miR-17-5p表达量的影响,并且进一步通过Western blot、免疫荧光观察检测LC3蛋白的表达量和自噬小体的数量。结果: MTB感染能够引起miR-17-5p的下调,随着感染复数的增加有明显的降低。而生物信息学预测结果显示miR-17-5p与ATG7具有靶向性,双萤光素酶报告实验、Western blot验证miR-17-5p能够和ATG7靶向结合,并对其进行负调控。进一步通过Western blot、免疫荧光观察发现miR-17-5p mimics组LC3Ⅱ的表达下调,自噬小体表达降低,而miR-17-5p inhibitor组相反。其中对H37Ra感染组与未感染组之间比较,ATG7和LC3Ⅱ蛋白表达明显增强。结论: miR-17-5p直接靶向结合ATG7 3 UTR抑制自噬,在巨噬细胞抗MTB过程中发挥作用。