申克孢子丝菌STE20基因RNA干扰菌株的构建方法

作     者：赵林 王林会 郑方亮 侯彬彬 ZHAO Lin;WANG Lin-hui;ZHENG Fang-liang;HOU Bin-bin

作者机构：大连医科大学附属第二医院大连116021 大连理工大学生命科学院大连116024 辽宁大学生命科学院沈阳110031 

出 版 物：《中国真菌学杂志》 (Chinese Journal of Mycology)

年 卷 期：2019年第14卷第3期

页      面：129-133页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年基金(81502737) 

主　　题：申克孢子丝菌 STE20 RNA干扰 载体构建 

摘      要：目的 构建真菌通用的RNA干扰载体,以广泛用在多种真菌基因干扰的研究中。方法 利用现有的植物双元表达载体进行改造,将pBlueScriptⅡ的多克隆位点(MCS)酶切下来构建干扰载体;为使载体适于农杆菌转化,加入T-DNA边界重复序列;为便于转化后的筛选,将潮霉素抗性基因构建到干扰载体上。改造以前的干扰载体仅适于青霉菌属的RNA干扰,为扩大干扰范围,扩增pSilent-1质粒中的真菌通用启动子Ptrpc,间隔序列和终止子Ttrpc,并引入潮霉素抗性基因,使其在间隔序列两侧加上目的基因的正反向干扰序列以构建载体。结果 利用本实验构建的载体PCB309-PSUST及优化的反应体系成功实现了对孢子丝菌STE20基因的有效干扰,操作简便、转化效率高、转化子稳定。结论 成功构建的这种载体适于根癌农杆菌介导,能够对多种丝状真菌基因进行RNA干扰研究用。