基于CRISPR/Cas9加工番茄α-Man突变体的构建

作     者：张圆圆 邵冬南 崔百明 ZHANG Yuan-yuan;SHAO Dong-nan;CUI Bai-ming

作者机构：石河子大学生命科学学院石河子大学农业生物技术重点实验室 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2019年第35卷第6期

页      面：9-15页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0902[农学-园艺学] 090102[农学-作物遗传育种] 090202[农学-蔬菜学] 

基　　金：石河子大学科学技术研究发展计划 

主　　题：加工番茄 CRISPR/Cas9 α-Man 果实成熟软化 

摘      要：为培育成熟果实软化程度低,货架期长的番茄植株,以加工番茄甘露糖苷酶基因(α-Man)为编辑对象,设计由番茄U6 启动子驱动、长21 bp 的guide RNA(gRNA)指导hCas9 核酸酶,靶向编辑α-Man 的第1 个外显子。首先构建基于CRISPR/Cas9 系统的植物表达载体,并通过农杆菌介导的遗传转化获得加工番茄转基因株系,然后取转基因番茄叶片基因组DNA,利用限制性内切酶法结合PCR 扩增对α-Man 编辑位点附近的DNA 片段进行检测及测序分析。结果表明,14 株转基因番茄植株有2 株检测到突变现象。α-Man 突变体TA 克隆测序结果显示有2 种编辑类型,一种表现为52 bp 的缺失突变;另一种表现为单碱基突变。实现了对番茄α-Man 的编辑。