一个编码4个不同基因RNAi的shRNA质粒的构建及其对CNE-2Z细胞增殖、凋亡和小鼠鼻咽癌移植瘤的影响
Construction and identification of shRNA eukaryotic vector system expressing four different genes and effects of shRAN vector on proliferation and apoptosis of CNE-2Z cells作者机构：郑州大学第一附属医院耳鼻喉科郑州450052 郑州市管城区疾病预防控制中心疾病控制科郑州450000
出 版 物：《郑州大学学报（医学版）》 (Journal of Zhengzhou University(Medical Sciences))
年 卷 期：2010年第45卷第6期
页 面：972-977页
学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
主 题：质粒构建与鉴定 短发卡RNA 鼻咽癌 CNE-2Z细胞 小鼠
摘 要：目的:构建同时表达VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因的shRNA真核表达质粒,研究其对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z的干扰作用。方法:根据VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因序列,各设计2条寡核苷酸序列,合成互补DNA链,插入真核表达质粒pGenesil-1中,同时构建单基因(VEGF)质粒pGenesil-2。分别转染CNE-2Z细胞,分为多基因质粒(P-1)组和单基因质粒(P-2)组,并设空白对照(BC)组和阴性对照(NC)组。采用MTT法检测细胞增殖活性。采用实时定量PCR和Western-blot检测4种基因在人鼻咽癌细胞系CNE-2Z中的表达。体内裸鼠成瘤实验观察单基因和多基因质粒干预对肿瘤的抑制作用。结果:通过酶切和测序证实重组真核表达载体构建正确。MTT显示细胞增殖受到抑制,且多基因质粒对细胞增殖的抑制作用明显强于单基因质粒。目的基因在mRNA和蛋白水平上表达均下降。裸鼠实验显示P-1组抑制肿瘤细胞增长的作用要强于P-2组。结论:成功构建一个载体编码4个不同基因的shRNA质粒载体系统。转染鼻咽癌细胞后,与单独沉默VEGF相比,同时干扰VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因可以更好地抑制细胞增殖。
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