膜联蛋白A5重组质粒的构建及其过表达对SiHa细胞增殖的影响

作     者：李欣 高福禄 LI Xin;GAO Fu-lu

作者机构：承德医学院基础研究所河北承德067000 河北师范大学石家庄050017 

出 版 物：《解剖学报》 (Acta Anatomica Sinica)

年 卷 期：2009年第40卷第1期

页      面：52-56页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：重组质粒 膜联蛋白A5 SiHa细胞 增殖 四甲基偶氮噻唑蓝法 

摘      要：目的构建膜联蛋白．A5（ANXA5）重组质粒并探讨过表达ANXA5对宫颈癌SiHa细胞的增殖产生的影响。方法将ANXA5基因克隆入含His标签的pcDNA3．1质粒载体，构建pcDNA3．1-ANXA5重组质粒；用磷酸钙共沉淀法将重组质粒和pcDNA3．1空质粒分别转染宫颈癌细胞系SiHa细胞，G418加压培养，免疫印迹法筛选过表达ANXA5的细胞克隆，免疫组织化学筛选已转染pcDNA3．1空质粒的细胞克隆；将过表达ANXA5蛋白的细胞、载有pcDNA3．1空质粒的细胞以及未处理的SiHa细胞分别进行四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）实验和CCK．8实验检测细胞增殖情况。结果成功构建了pcDNA3．1-ANXA5重组质粒，测序证实ANXA5基因序列正确；普通未处理的SiHa细胞和转染了pcDNA3．1空质粒的SiHa细胞生长速度较快，两组间无显著性差异（P〉0．05）；过表达ANXA5的SiHa细胞其增殖速度比前两组显著降低（P〈0．05）。结论膜联蛋白A5可能对宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖具有抑制作用。