结核分枝杆菌Rv3084编码酯酶LipR的生物学特性和体内免疫调节功能

作     者：张春曦 罗涛 马鹏娇 王楚涵 索靖 翟小倩 彭璇 鲍朗 ZHANG Chun-xi;LUO Tao;MA Peng-jiao;WANG Chu-han;SUO Jing;ZHAI Xiao-qian;PENG Xuan;BAO Lang

作者机构：四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室成都610041 

出 版 物：《四川大学学报（医学版）》 (Journal of Sichuan University(Medical Sciences))

年 卷 期：2019年第50卷第3期

页      面：291-297页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家传染病科技重大专项基金(No.2012ZX10003008-004)资助 

主　　题：结核分枝杆菌 Lip家族 α/β水解酶 脂酶/酯酶 细胞因子 

摘      要：目的探究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)Rv3084编码的酯酶LipR的生物学特性及其在体内的免疫调节功能。方法从MTB H37Rv标准毒力株扩增LipR基因,构建重组表达质粒;测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌,诱导LipR蛋白表达并纯化,Western blot鉴定;进行LipR酯酶活性检测,分析影响LipR酶活性的因素;将重组质粒于小鼠胫前肌肉注射0.1 mL(含质粒DNA 100μg)3次(第1,8,15天),末次注射后7 d,处死小鼠,取肺、脾脏进行细胞因子检测。结果成功构建重组表达质粒,并发现LipR蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体的形式表达,蛋白相对分子质量约为33×10~3;在标准水解活性实验条件(40℃,pH7.5)下,其最适水解底物为4-硝基苯基乙酸酯(pNPA,C2);以4-硝基苯基丁酸酯(pNPB,C4)作为底物,测得LipR水解活性的最适pH值为8.5,最适反应温度为40℃,说明LipR是一种相对耐碱耐热的酯酶;而在不同的除垢剂或金属离子存在的环境下,LipR水解pNPB的活性受到一定程度地抑制。重组质粒注射小鼠后,发现LipR能抑制γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-2的分泌,但IL-10分泌量增加。结论酯酶LipR可能参与帮助MTB协同抵抗宿主内苛刻的环境,并充当免疫调节剂,抑制促炎细胞因子分泌。