NF-κB1基因干扰质粒的构建及其对DEV增殖的影响

作     者：贺欣薇 郑敏 胡安东 杨颖 周碧君 程振涛 文明 HE Xin-wei;ZHENG Min;HU An-dong;YANG Ying;ZHOU Bi-jun;CHENG Zhen-tao;WEN Ming

作者机构：贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 重庆三峡职业学院重庆404155 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室贵州贵阳550025 贵州省动物生物制品工程技术研究中心贵州贵阳550025 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2019年第29卷第2期

页      面：106-110,160页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31260607 31560703) 贵州省百层次创新型人才项目(黔科合人才4009号) 贵州省科技创新人才团队建设项目(黔科合人才团队4016号) 贵州省科技平台及人才团队计划(黔科合平台人才5253) 

主　　题：DEV NF-κB 构建 RNA干扰 增殖 

摘      要：[目的]探究NF-κB对DEV增殖是否有影响。[方法]以NF-κB1基因作为靶基因,设计并构建4个不同p GPU6/GFP/Neo shRNA表达载体,通过荧光显微镜法观察转染后细胞荧光密度和RT-PCR检测转染细胞NF-κB1基因转录水平以筛选最佳干扰质粒,分3种不同组别进行干扰实验后,以荧光定量PCR法检测DEV-NP基因表达变化。[结果]所构建的重组质粒p GPU6/GFP/Neo-NF-κB1-2对细胞NF-κB1基因的干扰效率最高,可达78. 77%;除先感染后干扰组对DEV增殖影响不大外,先干扰后感染组与同时感染和干扰组均对DEV增殖呈现出一定的抑制作用,其中先干扰后感染组在第72 h时的沉默效率最高,可达78%,而同时感染和干扰组于第48 h时的沉默效率最高,可达82%。[结论]RNA干扰下调NF-κB1基因会抑制DEV增殖。