牛支原体P48蛋白及其片段的表达、纯化及间接ELISA检测方法的建立

作     者：马海彬 刘云霞 张必凯 韩继成 孙文超 解长占 靖杰 肖朋朋 张萍 尹逊哲 鲁会军 金宁一 MA Hai-bin;LIU Yun-xia;ZHANG Bi-kai;HAN Ji-cheng;SUN Wen-chao;XIE Chang-zhan;JING Jie;XIAO Peng-peng;ZHANG Ping;YIN Xim-ze;LU Hui-jun;JIN Nin-yi

作者机构：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林农业大学动物科技学院，吉林长春130118 广西大学动物科学技术学院吉林长春130062 吉林大学动物医学学院广西南宁53OOO4 延边大学，吉林延吉133002 长春中医药大学，吉林长春130117 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2019年第39卷第4期

页      面：678-682,694页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：吉林省科技发展计划资助项目(20140309024NY 20160623024TC) 

主　　题：牛支原体 P48蛋白 原核表达 蛋白纯化 间接ELISA 

摘      要：为了建立一种快速、特异、敏感的检测牛支原体血清抗体的方法,对牛支原体(***)P48膜蛋白基因进行密码子优化,并在编码基因两端加入酶切位点。利用生物学软件对P48蛋白进行抗原位点和亲水性分析,选择P48蛋白的主要抗原表位区和亲水性区域以及全基因进行原核表达。采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定及反应原性分析。结果显示,表达的P48全蛋白、28～185、221～455位氨基酸区域蛋白均能与牛支原体阳性血清发生特异性反应,P48(221～455)效果最好。采用Ni-NTA对目的蛋白进行纯化,并基于纯化的P48(221～455)蛋白建立了一种间接ELISA检测方法。该方法组内及组间变异系数均小于7%,重复性较好。临床样本检测结果表明,建立的检测方法符合率较高。