黑曲霉内切葡聚糖酶AnCel5A的表达纯化与晶体优化

作     者：颜俊杰 李玉洁 郑迎迎 陈纯琪 郭瑞庭 李华钟 刘卫东 YAN Junjie;LI Yujie;ZHENG Yingying;CHEN Chunchi;GUO Reyting;LI Huazhong;LIU Weidong

作者机构：江南大学教育部工业生物技术重点实验室江苏无锡214122 中国科学院天津工业生物技术研究所天津300308 

出 版 物：《食品与生物技术学报》 (Journal of Food Science and Biotechnology)

年 卷 期：2019年第38卷第2期

页      面：81-86页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：国家863计划项目(2012AA022209) 

主　　题：内切葡聚糖酶 纯化 结晶 结构 

摘      要：来源于黑曲霉(Aspergillus niger)的β-1,4-内切葡聚糖酶(AnCel5A)是糖苷水解酶第5家族成员,水解纤维素分子无定形区的β-1,4-糖苷键,在纤维素的降解过程中发挥关键作用。本研究通过对AnCel5A的结晶条件初筛,获得并优化AnCel5A晶体以期解析其蛋白质晶体结构。将截去N端信号肽的AnCel5A蛋白在Pichia pastoris X33/pPICZαA中进行表达,发酵液上清透析除盐并进行Endo H去糖基化酶切,后续依次通过离子交换层析、疏水层析,获得高纯度蛋白。通过坐滴气相扩散法对AnCel5A的结晶条件进行初筛,在CryoI screen kit (A6)孔中长出了初始晶体,经优化获得了更好的晶体。蛋白晶体于台湾新竹同步辐射中心(NSRRC)BL15A1线站进行了X射线衍射数据收集,结果显示其分辨率达到1.8?。