羰基还原酶基因工程菌产酶和不对称合成(R)-苯乙醇的条件优化

作     者：郝军莉 章英 杨天兵 王婷 杨宇 王丹 HAO Junli;ZHANG Ying;YANG Tianbing;WANG Ting;YANG Yu;WANG Dan

作者机构：成都医学院生物科学与技术学院四川成都610065 

出 版 物：《中国测试》 (China Measurement & Test)

年 卷 期：2019年第45卷第4期

页      面：73-79页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：四川省科技厅科技支撑项目(No.2016GZ0364) 四川省教育厅科研项目(16ZA0287 17ZA0102) 四川省卫生厅项目(18PJ586 16PJ103) 成都医学院科研创新团队项目(CYTD16-04) 

主　　题：羰基还原酶 基因工程菌 不对称合成 产酶条件 转化条件 

摘      要：以羰基还原酶基因工程菌全细胞为催化剂,探讨不对称合成(R)-苯乙醇的各种影响因素,优化其产酶和转化条件。结果表明,优化后的发酵培养基为甘油10 g/L、蛋白胨10 g/L、酵母粉5 g/L,(NH_4)_2SO_4 5 g/L、NaCl 10 g/L,氨苄青霉素50μg/mL,pH 7.2;诱导剂IPTG的浓度为0.25 mmol/L,诱导时间为20 h,诱导温度为18℃,此条件下测得基因工程菌粗酶活最高为6.65 U/mL。建立的最佳转化条件:羰基还原酶基因工程菌发酵20 h后的细胞浓度为0.3 g/mL,转化体系初始pH为7.0,温度为37℃,辅助底物异丙醇浓度为10%,底物终浓度为60 mmol/L,转化时间为24 h。此时底物转化率最高可达98.88%,产物对映体过量值(e.e.值)为99.43%。反应体系扩增至3 000 mL后,产物e.e.值仍保持在99.0%左右,底物转化率可为92%以上,(R)-苯乙醇的产量也可达到6.67 g/L。