人ureb1在大肠杆菌中高效表达及其抗体的制备

作     者：明文玉 林学颜 银巍 顾军 

作者机构：中山医科大学分子医学研究中心广州510080 中山医科大学免疫学教研室广州510080 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2001年第17卷第5期

页      面：228-231页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：广东省自然科学基金! (990 12 1)资助课题 教育部回国人员科研启动基金 

主　　题：人ureb1 DNA 重组 原核表达载体 抗体 大肠杆菌 重组融合蛋白 质粒 

摘      要：目的 :构建人的ureb1(hureb1)原核高效表达重组质粒 ,以此表达的外源蛋白为抗原制备抗ureb1的抗体。方法 :用XhoI/NotI从pGU 2质粒酶切得到hureb1的ORF与pGEX 4T 2的XhoI/NotI大片段连接 ,构建表达GST hureb1融合蛋白的重组载体。转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达。以粗制的GST hureb1融合蛋白分别免疫大白兔和小鼠 ,制备抗hureb1的多克隆抗体和单克隆抗体 ,采用WesternBlot进行特异性鉴定。结果 :构建了高效表达GST hureb1融合蛋白的原核表达载体 ,融合蛋白的表达量占菌体蛋白质总量的 33 45 %。以大肠杆菌表达的GST hureb1融合蛋白免疫动物制备了高滴度、高特异性的抗hureb1的抗体。结论 :利用重组GST hureb1融合蛋白免疫动物可获得高滴度的抗hureb1抗体。重组GST