产生芳香环聚酮类天然产物放线菌的分子筛选研究

作     者：徐平 李文均 高慧英 孙玉民 张华 徐丽华 贺建功 姜成林 Xu Ping;Li Wen-jun;GAO Hui-ying;Sun Yu-min;Zhang Hua;Xu Li-hua;He Jian-gong;JIANG Cheng-Lin

作者机构：云南大学教育部微生物资源开放研究重点实验室 华北制药集团新药研究开发有限责任公司石家庄050015 

出 版 物：《中国抗生素杂志》 (Chinese Journal of Antibiotics)

年 卷 期：2005年第30卷第3期

页      面：134-137页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 071005[理学-微生物学] 10[医学] 

基　　金：国家科技部基础研究重大项目(No.2001CCC00600) 云南省自然科学基金项目(No.2001C0001Q) 云南省教育厅基金项目(No.01111134 No.02QJ077) 教育部微生物资源研究重点实验室开放基金 

主　　题：聚酮合酶 芳香环聚酮类化合物 聚合酶链反应 极端环境 分子筛选放线菌 

摘      要：目的建立一套简便、快速、高效的芳香环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系,为聚酮类药物筛选搭建一个新的技术平台;认识PKS-II基因在不同环境放线菌群中的分布规律,为新药筛选中微生物资源的定向分离提供依据。方法通过对芳香环聚酮类化合物生物合成途径所用的II型聚酮合酶氨基酸和核苷酸序列的同源性比较分析,设计一对简并引物且以微波炉法提取的基因组DNA为模板扩增KS/CLF功能域约0.8kb目的基因片段,依据放线菌基因组中II型PKS合酶基因的存在与否标定可能的芳香环聚酮类天然产物产生菌。结果利用建立的芳香环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系对99株嗜碱放线菌、100株链霉菌、47株嗜盐放线菌和776株一般放线菌进行了筛选,研究表明链霉菌、嗜碱放线菌、嗜盐放线菌和一般放线菌II型聚酮合酶基因的阳性率分别为54%、29.3%、25.5%和24.1%。结论组合放线菌基因组DNA快速提取技术和PKSII基因简并引物PCR扩增技术建立了快速、简便、高效的芳香环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系并对不同环境条件的放线菌菌群的PKSII基因分布进行了研究。结果表明放线菌PKSII聚酮合酶分布具有广泛性;而且同时表明链霉菌是芳香环聚酮类化合物的最丰富来源;在极端环境放线菌中,嗜盐放线菌的PKSII基因在中度嗜盐放线菌分布的频率远高?