人PSMA基因重组腺病毒的构建及其在树突状细胞上的表达

作     者：王帅 杨明花 隋承光 ShuaiWANG;Minghua YANG;Chengguang SUI

作者机构：中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所沈阳市110001 

出 版 物：《中国肿瘤临床》 (Chinese Journal of Clinical Oncology)

年 卷 期：2012年第29卷第9期

页      面：510-513页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：辽宁省科技厅科学技术计划项目(编号:2010225034)资助 

主　　题：腺病毒 前列腺特异性膜抗原(PSMA) 树突状细胞 DC疫苗 

摘      要：目的:构建含有人前列腺特异性膜抗原基因(prostate specific membrane antigen,PSMA)的重组腺病毒,并将其感染树突状细胞(dendritic cell,DC)后检测其在DC上的表达。方法:设计一对含有Sfi I酶切位点的PSMA基因上下游引物,以质粒pCMV-SPORT6/PSMA为模板,通过PCR扩增获得PSMA基因序列。片段回收、酶切处理,连接到穿梭质粒pShuttle-CMV-EGFP上,获得重组穿梭质粒pShuttle-EGFP-PSMA经Sfi I酶切、PCR及插入片段测序鉴定正确后,将其用I-CeuI和I-SceI双酶切处理,转移至pAdxsi载体上,得到pAdxsi-GFP-PSMA病毒质粒,线性化后经HEK293细胞包装成复制缺陷型腺病毒Ad-PS-MA-GFP;感染从健康志愿者外周血来源的DC,荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western blot检测PSMA基因在DC上的表达。结果:成功构建含有人PSMA基因的重组腺病毒,病毒滴度为2×10^(10)pfu/mL构建好的Ad-PSMA-GFP可以在DC上高效和正确地表达结论:人PSMA重组腺病毒载体的成功构建及其在DC上的表达,为下一步研究奠定了基础。