新生儿疾病筛查血片微量DNA提取方法的建立及其在甲基化检测中的应用

作     者：陈秋萍 崔县伟 尤梁惠 季晨博 郭锡熔 Chen Qiuping;Cui Xianwei;You Lianghui;Ji Chenbo;Guo Xirong

作者机构：南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科210004 南京医科大学附属南京妇幼保健院医学研究中心210004 

出 版 物：《中华实用儿科临床杂志》 (Chinese Journal of Applied Clinical Pediatrics)

年 卷 期：2015年第30卷第8期

页      面：615-618页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

基　　金：国家973计划项目(2013CB530604) 国家自然科学基金(81330067) 

主　　题：新生儿血片 DNA分离 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 

摘      要：目的 建立新生儿疾病筛查血片DNA提取的方法,探索其在甲基化检测中的应用.方法 依据性别随机将新生儿出生时的血片样本20例分为2组：传统法组（10例）、改良试剂盒法组（10例）.从DNA浓度、完整性和是否适应于聚合酶链反应（PCR）研究,对抽提的DNA质量进行评估.进一步对DNA做重亚硫酸盐处理,采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测瘦素（Leptin）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因启动子区域甲基化水平变化.结果 改良试剂盒法抽提的DNA浓度为（5.70 ±0.81） mg/L,显著优于传统法[（3.50±0.45）mg/L]（=2.79,P0.05）;生化分析仪分析显示DNA片段完整性更好.琼脂糖凝胶电泳显示可以扩增出有效的18S基因PCR片段,说明抽提的DNA可以用于PCR相关实验研究;MSP结果显示不同血片样本甲基化Leptin、TNF-α基因启动子区域甲基化模式不同.结论 改良试剂盒方法可以简便有效地从干血片中提取DNA,而且抽提的DNA可以较好地用于基因甲基化研究;为从DNA甲基化的角度揭示疾病的发生,提供了新的研究方案和技术方法.