内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性的信号机制

作     者：李振 刘啸白 刘云会 薛一雪 王萍 刘丽波 LI Zhen;LIU Xiao-bai;LIU Yun-hui;XUE Yi-xue;WANG Ping;LIU Li-bo

作者机构：中国医科大学附属盛京医院神经外科辽宁沈阳110004 中国医科大学96期七年制辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院神经生物教研室辽宁沈阳110001 

出 版 物：《中国药理学通报》 (Chinese Pharmacological Bulletin)

年 卷 期：2014年第30卷第5期

页      面：632-637页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No 81272795,81171131,81172197,81272564,81372484,81072056) 高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(No 20092104110015,20102104110009) 沈阳市科学技术计划项目计划(No F13-220-9-15,F13-316-1-16,F13-316-1-19) 

主　　题：内皮-单核细胞激活多肽-II 血肿瘤屏障 通透性 蛋白激酶C RhoA 信号机制 

摘      要：目的探索内皮一单核细胞激活多肽-Ⅱ（endothelial monocyte activating polypeptide-II，EMAP-II）增强血肿瘤屏障（blood—tumor barrier，BTB）通透性的相关信号机制。方法采集出生3—5d的Wistar胎鼠的大脑皮质，应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后，接种于培养皿中进行脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells，BMECs）原代培养；将BMECs与C6脑胶质瘤细胞共培养，构建体外BTB模型；共培养后的BMEC被随机分成5组（每组6例）：对照组、EMAP-Ⅱ组、H7＋EMAP—11组、C3 exoenzyme＋EMAP-II组和C3exoenzyme＋H7＋EMAP—II组。测定跨内皮阻抗值和辣根过氧化物酶流量评估各组BTB通透性变化情况；Western blot法检测BMECs上紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达水平变化；免疫荧光法检测OC-cludin和ZO-1在BMECs上的分布与表达。Western blot法检测BMECs上肌球蛋白轻链（myosin light chain，MLC）和磷酸化肌球蛋白轻链（phosphomyosin light chain，pMLC）的表达水平变化。结果与对照组相比较，EMAP-II组BTB的通透性明显增高，BMECs上occludin和ZO-1的表达水平明显降低，pMLC的表达水平明显增高；EMAP—II的上述作用受到蛋白激酶c（protein kinaseC，PKC）抑制剂H7或（和）RhoA抑制剂C3exoenzyme预处理的明显抑制。结论信号分子PKC和RhoA在EMAP—II增强BTB通透性过程中发挥着重要的作用，信号通路PKC—pMLC和RhoA—pMLC参与调控该过程。