p53-EGFP表达载体的构建及其对A549的影响

作     者：胡昌亮 尹志刚 俸婷婷 周英 HU Chang-liang;YIN zhi-gang;FENG Ting-ting;ZHOU Ying

作者机构：贵州大学生命科学学院贵州贵阳550025 贵州省药食同源植物资源开发工程技术研究中心贵州贵阳550025 贵州省药食两用资源应用开发工程实验室贵州贵阳550025 贵阳中医学院药学院贵州贵阳550002 

出 版 物：《山地农业生物学报》 (Journal of Mountain Agriculture and Biology)

年 卷 期：2019年第38卷第1期

页      面：1-5页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：国家自然科学基金地区基金(81660576) 贵州省科技计划社会攻关计划项目(黔科合【2016】支撑2909) 贵州省科技重大专项子课题(黔科合J重大字2002-3-4) 贵州省高层次创新型人才培养(黔科合人才(2015)4032号) 贵州省药食同源植物资源开发工程技术研究中心(黔科合G字(2015)4001号) 

主　　题：EGFP 抑癌基因 p53 表达载体 A549细胞 

摘      要：构建具有EGFP标签的抑癌基因p53表达载体,并验证其对肺癌细胞A549的影响。以质粒pcDNA3.1-p53为模板,设计引物并进行PCR扩增获得目的基因p53,将获得的目的基因克隆至载体pcDNA3.1-EGFP上,用琼脂糖凝胶电泳检测目的条带,双酶切以及测序验证。将克隆好的载体,利用脂质体法转染A549细胞,荧光显微镜下观察,同时用MTT法测不同时间段细胞OD值。结果表明,琼脂糖凝胶电泳结果显示,目的基因扩增成功。双酶切及DNA测序结果均证实,成功构建了载体pcDNA3.1-EGFP-p53。转染A549细胞后,荧光显微镜下观察到绿色荧光。MTT法测定结果表明,目的基因转染的A549细胞组所测得的OD值明显低于对照组(p0.01)。因此,具有EGFP标签的抑癌基因p53表达载体pcDNA3.1-EGFP-p53构建成功,转染A549细胞后,对A549细胞具有一定抑制作用。为后续继续研究p53-MDM2生物发光能量共振转移作用奠定了基础。