利用λ-Red重组系统和平衡致死系统改造抗药性致腹泻工程疫苗

作     者：袁盛凌 王芃 刘向昕 王艳春 展德文 张兆山 YUAN Sheng-Ling;WANG Peng;LIU Xiang-Xin;WANG Yan-Chun;ZHAN De-Wen;ZHANG Zhao-Shan

作者机构：军事医学科学院生物工程研究所北京100071 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2006年第33卷第2期

页      面：10-15页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 090601[农学-基础兽医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：λ-Red重组系统 抗药性基因 平衡致死系统 

摘      要：质粒pMM085是含有猪毒素源性大肠杆菌(ETEC)的黏附素K88与无毒肠毒素LTA-B+基因的重组质粒,含氯霉素抗性基因,由此构建的菌苗株带有抗药性。利用平衡致死系统改建此疫苗株,即将质粒上的氯霉素抗性基因cat替换成asd基因,并把新构建的质粒转移到缺失asd基因的大肠杆菌X6097中。但由于质粒pMM085是一个23kD的大质粒,传统的基因工程操作不易进行,利用λ-Red重组系统,将表达Red重组蛋白的质粒pKD46转化含pMM085的大肠杆菌X6097,并用两端各带有39ntcat基因同源区、含全长asd基因的PCR产物电击转化此感受态细胞,在λ-Red重组系统的帮助下,成功实现了asd基因对cat基因的置换。