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逆向疫苗学及其研究进展

军事医学科学院院刊 2004年第3期28卷 201-204页

作者：张兆山军事医学科学院生物工程研究所北京100071

基于基因组的疫苗研发途径被称为逆向疫苗学 ,它不仅省时、经济 ,而且可为传统方法难于或根本无法开展的疫苗研究提供新的解决方法。逆向疫苗学的研究过程始于硅片 ,用计算机预测疫苗的所有抗原 ,不依赖于抗原是否丰富 ,也不需要微生物... 详细信息

基于基因组的疫苗研发途径被称为逆向疫苗学 ,它不仅省时、经济 ,而且可为传统方法难于或根本无法开展的疫苗研究提供新的解决方法。逆向疫苗学的研究过程始于硅片 ,用计算机预测疫苗的所有抗原 ,不依赖于抗原是否丰富 ,也不需要微生物是否能够体外培养。本文介绍逆向疫苗学的概况 ,特别是近年来在研制某些病原菌新疫苗方面的进展。

关键词：基因组疫苗逆向疫苗学

利用展示尿素酶B表位的大肠杆菌菌蜕递送幽门螺杆菌核酸疫苗

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生物化学与生物物理进展 2011年第6期38卷 536-542页

作者：张瑞平刘纯杰陶好霞刘向昕张兆山军事医学科学院生物工程研究所北京100071 河北经贸大学生物科学与工程学院石家庄050061

探讨和分析了重组大肠杆菌菌蜕递送系统能否进一步提高幽门螺杆菌核酸疫苗的免疫应答水平.首先构建了展示尿素酶B表位的重组大肠杆菌菌蜕,然后以此菌蜕包裹幽门螺杆菌核酸疫苗pcDNAKAT,经DNA凝胶电泳、荧光显微镜观察和FACS分析,表明该... 详细信息

探讨和分析了重组大肠杆菌菌蜕递送系统能否进一步提高幽门螺杆菌核酸疫苗的免疫应答水平.首先构建了展示尿素酶B表位的重组大肠杆菌菌蜕,然后以此菌蜕包裹幽门螺杆菌核酸疫苗pcDNAKAT,经DNA凝胶电泳、荧光显微镜观察和FACS分析,表明该质粒DNA可以非特异地结合到大肠杆菌菌蜕内膜上.该核酸疫苗经重组菌蜕包裹后免疫小鼠,其血清抗过氧化氢酶抗体效价由单独免疫时的1∶(307±39)提高到1∶(520±54),二者差异极显著(P=0.005 8),结果表明利用菌蜕递送系统能较好地提高核酸疫苗的免疫应答水平.

关键词：核酸疫苗菌蜕幽门螺杆菌递送系统

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TDCR方法测量^(89)Sr溶液活度

核电子学与探测技术 2009年第5期29卷 1055-1056,1154页

作者：王载勇张兆山中国计量科学研究院北京100013 核工业北京地质研究院北京100029

使用TDCR方法对89Sr溶液进行了绝对测量,解决了短寿命纯β核素测量中的技术问题,合成标准不确定度达到0.63%。尤其为扩大89Sr溶液在核医学领域的应用提供了快速、准确、可靠的测量方法。

关键词：绝对测量总探测效率E

人源肠毒素大肠杆菌CS3伞毛抗原结构基因的克隆…

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中华微生物学和免疫学杂志 1993年第6期13卷 345-350页

作者：董自正张兆山

利用体外基因扩增技术（ＰＣＲ）和ＤＮＡ重组技术，扩增克隆了人源肠毒素大肠杆菌（ＥＴＥＣ）的ＣＳ３伞毛抗原的结构基因。核苷酸序列分析证实克隆的ＤＮＡ片段长度为６０４核苷酸对（ｂｐ）。在该序列中含有单个开放阅读框架，并具... 详细信息

利用体外基因扩增技术（ＰＣＲ）和ＤＮＡ重组技术，扩增克隆了人源肠毒素大肠杆菌（ＥＴＥＣ）的ＣＳ３伞毛抗原的结构基因。核苷酸序列分析证实克隆的ＤＮＡ片段长度为６０４核苷酸对（ｂｐ）。在该序列中含有单个开放阅读框架，并具有－１０区和－３５区启动子序列以及核糖体结合位点。根据核苷酸序列推导，ＣＳ３结构基因编码１６８个氨基酸。其中前１５个氨基酸为可能的信号肽部分。在该基因编码的氨基酸中。

关键词：大肠杆菌 CS3伞毛基因克隆

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细菌芽胞——一种新型的疫苗载体

微生物学报 2008年第3期48卷 413-417页

作者：王艳春张兆山军事医学科学院生物工程研究所北京100071

杆菌属的芽胞作为益生菌已经应用于人和动物的食品生产和细菌疗法。目前,芽胞作为一种新型的疫苗载体,开始用于破伤风、炭疽等疫苗的研究。与目前的第二代疫苗相比,细菌芽胞热稳定性好,遗传操作方便,是一种理想的疫苗载体。本文就其作... 详细信息

杆菌属的芽胞作为益生菌已经应用于人和动物的食品生产和细菌疗法。目前,芽胞作为一种新型的疫苗载体,开始用于破伤风、炭疽等疫苗的研究。与目前的第二代疫苗相比,细菌芽胞热稳定性好,遗传操作方便,是一种理想的疫苗载体。本文就其作为疫苗载体的相关研究进行综述。

关键词：细菌芽胞疫苗疫苗载体

肠毒素大肠杆菌定居因子抗原基因CFA-I在痢疾杆菌中的表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第3期33卷 277-280页

作者：张波李淑琴陈冠军黄翠芬张兆山山东大学生命科学院微生物技术国家重点实验室!济南250100 北京生物工程研究所!北京100071

通过体外重组的方法 ,构建了包含asd基因的重组表达质粒 pZHY2 1,与福氏志贺氏菌Fwl0 1构成了宿主载体平衡致死系统 ,Western印迹结果表明 ,在没有抗生素条件选择的情况下 ,稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CFA I。电镜结果显示 ,... 详细信息

通过体外重组的方法 ,构建了包含asd基因的重组表达质粒 pZHY2 1,与福氏志贺氏菌Fwl0 1构成了宿主载体平衡致死系统 ,Western印迹结果表明 ,在没有抗生素条件选择的情况下 ,稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CFA I。电镜结果显示 ,在重组菌株的菌体表面 ,表达产物能够装配成菌毛。重组菌通过口服和鼻饲免疫小鼠后 ,可以诱生CFA I的抗体 ;同时可以检测到分泌型IgA产生 ,表明重组菌可以诱导相应的粘膜免疫反应

关键词：肠毒素大肠杆菌 CFA-I 痢疾杆菌平衡致死系统

ET重组:Escherichia coli中最新分子克隆方法

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军事医学科学院院刊 2002年第4期26卷 289-293页

作者：王芃段海清张兆山军事医学科学院生物工程研究所北京100071

功能基因组研究的飞速发展推动了在E .coli中运用体内同源重组的方法进行DNA操作的技术革新步伐 ,ET体内重组方法具有应用范围广、操作灵活简便、重组效率高等优点 ,它可进行常规分子生物学无法实现的操作。这种方法不依赖于合适的限制... 详细信息

功能基因组研究的飞速发展推动了在E .coli中运用体内同源重组的方法进行DNA操作的技术革新步伐 ,ET体内重组方法具有应用范围广、操作灵活简便、重组效率高等优点 ,它可进行常规分子生物学无法实现的操作。这种方法不依赖于合适的限制酶切位点 ,能够在靶分子的任意位置上进行基因的插入、缺失和替换 ;能够直接进行亚克隆并且还可以从细菌人工染色体和基因组DNA片段中克隆所需DNA。本文所阐述的方法可应用于包括长DNA在内的任意大小DNA的修饰。

关键词：大肠杆菌体内同源重组 ET重组基因工程

肠毒素大肠杆菌定居因子CS3和肠毒素融合抗原基因在减毒鼠伤寒沙门氏菌中的共表达(英文)

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Acta Genetica Sinica 2002年第4期29卷 370-376页

作者：徐兵张兆山李淑琴舒东黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京100071

不耐热肠毒素 (LT)和耐热肠毒素 (ST)是产肠毒素大肠杆菌的主要致病因素 ,CS3为该菌的优势定居因子 ,是定居因子CFA/II菌毛抗原的共有抗原组分。采用基因操作技术将编码CS3和融合肠毒素蛋白基因转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗候选株X4 0... 详细信息

不耐热肠毒素 (LT)和耐热肠毒素 (ST)是产肠毒素大肠杆菌的主要致病因素 ,CS3为该菌的优势定居因子 ,是定居因子CFA/II菌毛抗原的共有抗原组分。采用基因操作技术将编码CS3和融合肠毒素蛋白基因转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗候选株X4 0 72中进行表达。用重组菌株口服免疫小鼠后 ,免疫动物能产生抗CS3、LT和ST的血清抗体。特别有意义的是 ,所产生的抗ST抗体能中和天然ST的生物活性。

关键词：肠毒素大肠杆菌定居因子CS3 肠毒素融合抗原基因减毒鼠伤寒沙门氏菌共表达

幽门螺杆菌AlpA基因中四种黏附素基因保守区的克隆、表达、纯化及鉴定

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生物化学与生物物理进展 2002年第6期29卷 922-926页

作者：白杨但汉雷王继德张兆山 S.ODENBREIT 周殿元张亚历第一军医大学南方医院全军消化病研究所广州510515 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 Max-Planck-Institut fur Biologie Abteilung InfektionsbiologieTubingen

幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因 ,与胃腺癌、胃黏膜相关淋巴样组织 (MALT)淋巴瘤的发生亦密切相关 .鉴于Hp已证实的四种粘附素保守区 (AB)是外膜蛋白 (OMP)和膜孔素 (porin)样成分 ,而... 详细信息

幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因 ,与胃腺癌、胃黏膜相关淋巴样组织 (MALT)淋巴瘤的发生亦密切相关 .鉴于Hp已证实的四种粘附素保守区 (AB)是外膜蛋白 (OMP)和膜孔素 (porin)样成分 ,而外膜蛋白和膜孔素样成分是优秀的疫苗候选抗原 .用PCR技术扩增AB基因 ,将其定向插入 pET 2 2b (+)载体 ,在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 .测序显示AB基因长 5 88bp ,编码 195个氨基酸 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶扫描分析 ,AB基因表达的蛋白质分子质量约为 2 2 5ku ,其重组蛋白质表达量占菌体总蛋白质的 2 9% ,表达产物经亲和层析纯化后蛋白质纯度达 96 % .经免疫印迹证实该重组蛋白可以被AlpA免疫兔血清所识别 .

关键词：幽门螺杆菌 AlpA基因黏附素基因保守区克隆表达纯化鉴定