猪圆环病毒Ⅱ型抗体间接ELISA检测方法的建立

作     者：李坤 温国元 罗青平 商雨 艾地云 罗玲 王红琳 杨峻 邵华斌 程国富 LI Kun;WEN Guo-yuan;LUO Qing-ping;SHANG Yu;AI Di-yun;LUO Ling;WANG Hong-lin;YANG Jun;SHAO Hua-bin;CHENG Guo-fu

作者机构：华中农业大学动物医学院武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 

出 版 物：《华中农业大学学报》 (Journal of Huazhong Agricultural University)

年 卷 期：2009年第28卷第6期

页      面：710-714页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：湖北省科技攻关项目(2007AA402C55)资助 

主　　题：猪圆环病毒2型 核衣壳基因 原核表达 间接ELISA 

摘      要：建立了检测猪圆环病毒2型血清抗体的间接ELISA方法，并初步应用于临床血清样品的检测。用PCR方法从PCV2 HBZX株中获得截短的核衣壳（capsid，Cap）基因，将该基因克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中，构建重组表达质粒pET-Cap，将该重组质粒转化宿主菌Ecoli BL21-CodonPlus（DE3），用IPTG诱导，SDS-PAGE和Western—blot鉴定蛋白的正确表达，表达蛋白Cap分子质量为42ku，可与6×HIS抗体反应；KCI预染切胶纯化目的蛋白，以其为抗原建立检测PCV2感染猪血清抗体的间接ELISA方法。ELISA检测5份血清样品结果变异系数均小于10％。用该方法分别检测湖北、河南等地的91份临床血清样品，阳性率为25％～100％。上述结果表明，所制备的目的蛋白具有较高的纯度和良好的免疫原性，所建立的间接ELISA检测抗体方法，具有良好的重复性，初步临床试用效果良好。