慢病毒载体GV115介导Caspase-3 siRNA转染人椎间盘髓核细胞的生物学效应

作     者：赛佳明 马学晓 邱晨生 陈伯华 胡有谷 

作者机构：青岛大学附属医院脊柱外科山东省青岛市266003 

出 版 物：《中国脊柱脊髓杂志》 (Chinese Journal of Spine and Spinal Cord)

年 卷 期：2015年第25卷第12期

页      面：1090-1094页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:81171758) 

主　　题：髓核细胞 慢病毒 Caspase-3 RNA干扰 基因治疗 

摘      要：目的 ：研究慢病毒载体GV115介导Caspase-3 si RNA转染人椎间盘髓核细胞的生物学效应。方法 ：采集12例外伤致脊柱爆裂性骨折患者（22~36岁）术中切除的椎间盘髓核组织,采用组织块法分离培养髓核细胞并传代。取第2代髓核细胞,分为GV115-Caspase3 si RNA组、GV115组和对照组,各组12个细胞培养孔。在荧光显微镜下观察计数阳性髓核细胞,计算GV115-Caspase3 siRNA对人椎间盘髓核细胞的转染效率;采用免疫荧光法检测三组髓核细胞中Caspase-3表达;采用MTT法检测三组髓核细胞活性;采用Western-Blot法和Antonopulos法分别检测三组髓核细胞的Ⅱ型胶原和蛋白多糖含量。结果 ：椎间盘髓核细胞被成功分离培养,培养1周后细胞达到80%融合,进行传代培养。转染后1周（85.6±1.3）%的髓核细胞可被GV115-Caspase3 si RNA转染而表达绿色荧光素。GV115-Caspase3 siRNA组Caspase-3免疫荧光阳性细胞率[（19.4±3.2）%]较GV115组[（84.3±9.2）%]和对照组[（83.9±8.7）%]明显减少（P〈0.05）,OD值（1.56±0.21）较GV115组（0.91±0.15）和对照组（0.92±0.17）高（P〈0.05）,Ⅱ型胶原免疫印迹染色强度（1.32±0.09）较GV115组（0.81±0.05）和对照组（0.79±0.04）高（P〈0.05）,蛋白多糖含量（0.56±0.09）较GV115组（0.35±0.06）和对照组（0.34±0.05）高（P〈0.05）。结论：GV115-Caspase3 siRNA可高效转染人椎间盘髓核细胞,增强髓核细胞的生物活性,并促进细胞外基质的合成。