人胎盘泌乳素的原核表达及纯化

作     者：曲影 张小楠 聂彩霞 姬朝光 刘柱 刘永茂 

作者机构：吉林大学白求恩医学院病原免疫细胞遗传学实验中心吉林长春130021 长春德来福生物技术有限公司吉林长春130062 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2013年第26卷第5期

页      面：661-663,669页

学科分类：071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 090102[农学-作物遗传育种] 0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 0817[工学-化学工程与技术] 0703[理学-化学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：吉林省科技计划项目(20110962) 

主　　题：人胎盘泌乳素 原核细胞 基因表达 纯化 

摘      要：目的原核表达并纯化人胎盘泌乳素(Human placenta lactogen,hPL)。方法从正常产妇新鲜胎盘组织中提取组织总RNA,PCR扩增hPL基因,将其亚克隆至pQE-30载体,构建重组表达质粒,转化感受态大肠杆菌M15(pREP4),经IPTG诱导表达。表达产物经Sephacryl S-200层析柱纯化,纯化产物经SDS-PAGE和western blot鉴定其纯度和特异性。结果重组菌pQE-hPL/M15(pREP4)经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约23 000,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的67%;纯化后目的蛋白纯度可达90%以上;纯化蛋白和hPL包涵体均可与羊抗hPL多克隆抗体特异性结合,具有较强的特异性和抗原性。结论已成功制备了纯度较高的hPL蛋白,为基因工程制备抗体提供了抗原。