hVEGF_(165)和嵌合水蛭肽融合基因的构建、表达和活性检测

作     者：沈雳 陈少萍 秦永文 蔡在龙 SHEN Li;CHEN Shao-Ping;QIN Yong-Wen;CAI Zai-Long

作者机构：第二军医大学长海医院心内科上海200433 第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200433 

出 版 物：《生物化学与生物物理进展》 (Progress In Biochemistry and Biophysics)

年 卷 期：2005年第32卷第11期

页      面：1061-1068页

核心收录：

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 090102[农学-作物遗传育种] 0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 0703[理学-化学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30200281).~~ 

主　　题：血管内皮生长凼子 水蛭肽 融合基因 pcDNA3.0 载体构建 基因表达 

摘      要：根据抗PTCA或支架后再狭窄的基因治疗需要多基因治疗的特点,用基因重组技术构建了hVEGF165和嵌合水蛭肽(fusedhirudin,FH)融合基因,并克隆到真核表达载体pcDNA3.0中,通过脂质体介导将pcDNA3.0/hVEGF165-FH转染到人内皮细胞株(ECV304)中,RT-PCR及蛋白质印迹证明融合基因hVEGF165-FH在ECV304细胞中得到表达(分子质量为24ku左右).通过体外活性检测——MTT法检测hVEGF165-FH对ECV304细胞增殖的影响,通过体外血管生成分析hVEGF165-FH对内皮细胞株ECV304增殖的影响.通过体外抗栓活性检测,表明表达产物具有促进内皮细胞株增殖及加快血管生成的作用,同时显著抑制了ADP诱导的血小板聚集率(P0.05)并显著延长APTT和TT(P0.05).实验结果表明,融合基因在内皮细胞株中得到表达,表达的融合蛋白具有hVEGF165和嵌合水蛭肽(FH)的双重活性,这为以后的融合基因治疗再狭窄的动物实验打下了良好基础.