猪带绦虫六钩蚴表膜结合蛋白45WB_2基因在毕赤酵母中的表达

作     者：王谨 骆学农 岳城 胡志敏 才学鹏 WANG Jin;LUO Xue-nong;YUE Cheng;HU Zhi-min;CAI Xue-peng

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046 新疆农业大学化工学院乌鲁木齐830052 

出 版 物：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 (Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases)

年 卷 期：2005年第23卷第3期

页      面：171-174页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家重大基础研究发展规划项目(No.G1999011906)~~ 

主　　题：猪带绦虫 六钩蚴表膜结合蛋白基因 毕赤酵母菌 基因表达 

摘      要：目的从猪带绦虫六钩蚴总RNA中扩增45WB2基因,并在甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K中获得高效表达。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从孵化激活的六钩蚴克隆获得459bp的基因,亚克隆至酵母分泌表达载体pPIC9K中,经测序验证读码框正确后,重组质粒电转化毕赤酵母SMD1168菌株。用PCR方法检测结果表明,目的基因整合进毕赤酵母染色体DNA中。重组菌株用1%甲醇诱导,分别取诱导72和96h的上清和沉淀进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Westernblotting)分析。结果重组菌株在毕赤酵母中的表达蛋白分子量为Mr16000,表达产物占上清总蛋白量的32.8%,且能被猪囊尾蚴病患者血清识别。结论基因在毕赤酵母中成功表达,表达产物有望作为免疫原用于猪囊尾蚴病的免疫预防。